海萝多糖的组成及抗肿瘤作用的研究
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摘要
本文研究了采自广东汕头南澳海域的海萝中多糖的组成,并研究了海萝多糖抗肿瘤的生理活性和抗肿瘤机理。
     采用80℃热水提取、乙醇沉淀得海萝粗多糖,粗多糖再经过Sevag法去蛋白、透析、冷冻干燥后得纯度达96%的海萝精多糖。利用DEAE纤维素离子交换柱层析进一步分离纯化多糖,并对多糖的组成进行了分析。结果表明,海萝多糖中只有一个多糖组分,其结构的主要组成为6-硫酸基-D-半乳糖与3,6-内醚-L-半乳糖。
     分别采用Fenton体系和邻苯三酚自氧化法测定了海萝多糖对·OH和·O_2~-的清除能力、鸡胚尿囊膜实验测定对血管生成的作用、用体外培养的Hela做细胞毒实验,结果表明海萝多糖对·OH和·O_2~-有着较好的清除效果;对血管生成有一定的抑制作用,但对Hela细胞没有杀伤作用。
     观察了海萝多糖对小鼠移植性S_(180)肉瘤和H_(22)肉瘤的影响,并测定了多项指标。结果表明,海萝多糖对S_(180)肉瘤和H_(22)肉瘤都有较大的抑制作用,抑制率均在30%以上;肿瘤组织的DNA ladder电泳和切片HE病理分析表明,海萝多糖引起了肿瘤细胞的凋亡和坏死;给予海萝多糖后小鼠肝组织和肿瘤组织中的脂质过氧化物(MDA和LPO)水平下降、SOD水平上升,脾指数和血清中抗肿瘤抗体水平上升,血清和肿瘤组织的转氨酶测定表明,海萝多糖使肿瘤组织中的转氨酶活力下降、粗多糖灌胃使血清转氨酶活力下降、精多糖注射使血清转氨酶活力上升;石蜡切片免疫组化结果显示,海萝多糖使肿瘤组织中的突变型P53蛋白含量明显减少。
     综上,海萝多糖有较好抑制肿瘤生长的作用,其机理是抑制肿瘤血管生成、清除自由基、提高机体的非特异性免疫和体液免疫、减少突变型P53蛋白水平;海萝粗多糖灌胃对荷瘤小鼠受损的肝功能有恢复作用,但海萝精多糖注射对小鼠肝组织有损伤作用。
In this paper the chemical composition, anti-tumor activity and mechanism ofpolysaccharide from Gloipeltis furcata, collected from the sea area around Nan'ao Island,Shantou city, Guangdong province, were analyzed.
     The crude polysaccharide of Gloipeltis furcata (CPGF) was isolated byalcohol-precipitating from hot water extraction, and the polysaccharide of Gloipeltis furcata(PGF) was isolated by protein-depositing with Sevag from CPGF, and the purity of PGF was96%. The chemical composition of polysaccharide from the PGF was analyzed. The resultshowed that the PGF was separated into only a big fraction by DEAE. The basic units of this bigfraction was 6-sulphate-D-galactose and 3, 6-anhydro-L-galactose.
     The scavenging activities on·OH of Fenton reaction and·O_2~- produced by pyrogallic acid,the inhibiting angiogenesis effect chicken chorioallantoic membrane(CAM) mode and Theinhibition of cell lines Hela in vitro in MTT assay were examined. The result showed that thescavenging activities and inhibiting angiogenesis effect of CPGF and PGF on·OH and·O_2~- werevery good, but CPGF and PGF can not kill the Hela in vitro.
     The anti-tumor activity of CPGF and PGF was studied. The result showed that CPGF andPGF showed obvious anti-tumor effect on S_(180) and H_(22) tumor-bearing mice and inhibition rateswere over 30%; DNA ladder and HE analysis showed that the polysaccharide induced tumor cellapoptosis and death; In the tumor-bearing mice administered polysaccharide, it had been foundthe lever of MDA(LPO) decreased, while the lever of SOD, spleen indices and lever,antibodies against tumor increased in the tumor-bearing mice administered polysaccharide, andthe lever of GOT decreased in the tumor. The GOT lever in sera was decreased by administeringCPGF via the oral route while increased by administering PGF via inject. The result of theparaffin section analyzed with immunohistochemistry showed that less expression of themutation of P53 in tumor of the PGF group.
     In conclusion, the polysaccharide of Gloipeltis furcata had the ability of anti-tumor and itsmechanism of anti-tumor effect maybe inhibit angiogenes, enhance the unspecific immunity andlevel of antibodies against tumor, the ability of clearing free radical and induce less expression ofthe mutation of P53 protein; but it would not good for the liver by administering PGF via inject.
引文
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